UV-Vis在蛋白濃度測定的應用

         ——使用可變技術驗證及實現(xiàn)法測量

Scott Huffman，Keyur Soni，and Joe Ferraiolo

本摘要翻譯于BioProcess International期刊2014年9月版

耗時的、易導致誤差的溶液梯度稀釋以及固定光程的局限性常常在使用紫外分光光度計測定未知物濃度時困擾著諸多實驗員及科學家。由C Technologies研發(fā)出的SoloVPE提供的一種革命性的嶄新的基于朗伯比爾定律的光譜方法-斜率光譜技術，通過建立吸光度-光程的線性回歸方程得出斜率從而得到未知物的濃度完美地解決了這一項歷史難題。

在紫外分光光度計的應用中，其原理朗伯比爾定律的數(shù)學表達式為A=elc。其中A是吸光度值，e是摩爾消光系數(shù)，l是光程以及c是濃度。而斜率光譜技術完美地運用等式的轉換得到A/l=ac的數(shù)學公式。我們便可以將朗伯比爾定律公式轉換成新的線性回歸方程，用A=ml+b表達。其中m是回歸線性的斜率，b是在Y軸的截距。通過前兩個公式的等量轉換我們可以得出m=ac.，該等式也通常被稱之為斜率光譜方程。若是被測物的摩爾消光系數(shù)已知，我們將之帶入方程便能得到其濃度。反之亦然。這個方法通過控制光程的可變同時獲得吸光度值從而快速地得到準確且重復性高的結果。SoloVPE配置的自動尋找線性范圍的運算邏輯，可在儀器線性范圍內快速地、準確地得到理想的吸光度值。它將在線性范圍內連續(xù)地在不同光程下測得5-10個吸光度值，然后通過軟件擬合吸光度-光程的線性回歸方程并且計算得出回歸方程的斜率m，截距b以及線性回歸系數(shù)R²值。最后通過將斜率值與該被測物的摩爾消光系數(shù)代入斜率光譜方程得出被測物的濃度。